Differenza tra elettroforesi su gel e PAGINA SDS

Il differenza principale tra elettroforesi su gel e SDS PAGE è quello elettroforesi su gel è una tecnica utilizzata per separare DNA, RNA e proteine ​​mentre la SDS PAGE è un tipo di elettroforesi su gel usata principalmente per separare le proteine. Generalmente, la PAGINA SDS offre una risoluzione migliore rispetto all'elettroforesi del gel normale.  

Elettroforesi su gel e PAGINA SDS sono tecniche in biotecnologia che aiutano nella separazione delle macromolecole in base alla carica e alle dimensioni. In genere, l'elettroforesi su gel utilizza la stabilizzazione di gel di agarosio per la separazione mentre la SDS PAGE utilizza le schiume di gel di poliacrilamide.  

Aree chiave coperte 

1. Cos'è l'elettroforesi su gel
     - Definizione, procedura, importanza
2. Cos'è la PAGINA SDS
     - Definizione, procedura, importanza
3. Quali sono le somiglianze tra elettroforesi su gel e pagina SDS
     - Profilo delle caratteristiche comuni
4. Qual è la differenza tra elettroforesi su gel e PAGINA SDS
     - Confronto tra le principali differenze

Termini chiave: Agarosio, DNA, elettroforesi su gel, poliacrilammide, proteine, pagina SDS 

Cos'è l'elettroforesi su gel 

L'elettroforesi su gel è una tecnica che separa frammenti di macromolecole come DNA, RNA e proteine ​​in base alla loro dimensione e carica. Durante l'elettroforesi su gel, le macromolecole si muovono sotto l'influenza di un campo elettrico su una matrice di gel, che contiene pori attraverso i quali si muovono le macromolecole. L'elettroforesi su gel è la tecnica generale che analizza il DNA da PCR, RFLP, clonazione, sequenziamento del DNA o tecniche di blotting. Le nanoparticelle possono anche essere separate mediante elettroforesi su gel. L'iniezione di gel viene preparata da un polisaccaride chiamato agarosio derivato da alghe. I gel di agarosio consistono in molecole di agarosio a catena lunga interconnesse come una ragnatela. Il video 1 descrive la preparazione di un gel di agarosio. 

Sia il DNA che l'RNA contengono gruppi fosfato in ciascuno dei loro nucleotidi monomerici. Quindi, possiedono la stessa carica negativa in tutta la molecola. Inoltre, migrano verso l'elettrodo positivo sotto il campo elettrico. La velocità della migrazione dipende dalla dimensione dell'acido nucleico. Le molecole più corte migrano più velocemente attraverso i pori mentre quelle più grandi richiedono del tempo.  

Figura 1: DNA Bands su un gel di agarosio

Cos'è la PAGINA SDS 

SDS PAGE (elettroforesi su gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide) è una tecnica analitica utilizzata per separare le molecole caricate in base alle dimensioni. In questo processo, la SDS viene utilizzata per isolare le proteine ​​denaturandole. Come SDS è un detergente; la struttura terziaria delle proteine ​​viene interrotta da essa, portando la proteina piegata verso il basso in una molecola lineare. Inoltre, ricopre quella molecola proteica lineare con una carica negativa uniforme. La PAGINA SDS è composta da due gel con diverse concentrazioni. Lo strato superiore è chiamato gel di impilamento su cui sono caricati i campioni mentre lo strato inferiore è chiamato gel di risoluzione. La concentrazione di poliacrilammide del gel di impilamento è del 3,5-4% (grande dimensione dei pori) e concentra le proteine ​​in una banda. La concentrazione di poliacrilammide nel gel risolvente è del 4-20% (piccola dimensione dei pori) e separa le proteine ​​in base alla loro dimensione. Il video 2 mostra la preparazione di una PAGINA SDS. 

SDS PAGE fornisce una rapida separazione delle proteine, aiutando l'analisi successiva come il Western blotting.  

Figura 2: Proteine ​​Bands su SDS PAGE

Poiché il potere risolvente di SDS PAGE è superiore a un normale gel di agarosio, SDS PAGE aiuta a separare piccoli frammenti di DNA con dimensioni di 5-500 bp.  

Somiglianze tra elettroforesi su gel e pagina SDS 

• L'elettroforesi su gel e la PAGINA SDS sono tecniche che separano le macromolecole in base alla loro carica e dimensione. 
• Entrambe le tecniche usano una protesi di gel con piccoli pori attraverso cui si muovono le macromolecole. 
• La forza trainante è la differenza di potenziale tra i due elettrodi. 

Differenza tra elettroforesi su gel e PAGINA SDS 

Definizione 

Elettroforesi su gel: Tecnica utilizzata per separare frammenti di macromolecole come DNA, RNA e proteine ​​in base alle loro dimensioni e alla loro carica

PAGINA SDS: Una tecnica analitica utilizzata per separare le molecole caricate in base alle dimensioni 

Composizione 

Elettroforesi su gel: Uguale in tutto il gel; fatto di agarosio 

PAGINA SDS: Due gel con diverse concentrazioni; costituito da poliacrilammide 

Esegui configurazione 

Elettroforesi su gel: Corsa orizzontale 

PAGINA SDS: Corsa verticale 

Metodologia della fusione 

Elettroforesi su gel: Imposta come si raffredda 

PAGINA SDS: Imposta da una reazione chimica 

Dimensione dei pori 

Elettroforesi su gel: La dimensione dei pori non è uniforme; maggiore è la concentrazione di agarosio, minore è la dimensione dei pori 

PAGINA SDS: La dimensione dei pori è uniforme; il rapporto tra acrilammide e bis-acrilammide determina la dimensione dei pori 

Concentrazione 

Elettroforesi su gel: 0,5-2%  

PAGINA SDS: 6-15% 

Separazione 

Elettroforesi su gel: Acidi nucleici da 50-20.000 bp 

PAGINA SDS: 5-250.000 proteine ​​Da 

condizioni 

Elettroforesi su gel: Generalmente eseguito in condizioni native 

PAGINA SDS: Condizioni di denaturazione 

Preparazione 

Elettroforesi su gel: Semplice 

PAGINA SDS: Un processo complesso 

colorazione 

Elettroforesi su gel: Con bromuro di etidio 

PAGINA SDS: Colorazione di Coomassie o colorazione d'argento  

Conclusione 

L'elettroforesi su gel è una tecnica analitica che separa le macromolecole come il DNA, l'RNA e le proteine ​​in base alle loro dimensioni. SDS PAGE è un tipo di elettroforesi su gel principalmente utilizzato per separare le proteine ​​in condizioni denaturanti. La PAGINA SDS ha un potere risolutivo più elevato rispetto alla normale elettroforesi su gel. La principale differenza tra elettroforesi su gel e SDS PAGE è il tipo di macromolecole separate e la loro procedura. 

Riferimento:

1. "Elettroforesi su gel". Khan Academy, disponibile qui
2. "Elettroforesi su gel di poliacrilammide SDS (SDS-PAGE)." Diamantina Institute, 26 aprile 2017, disponibile qui

Cortesia dell'immagine:

1. "Gel elettroforesi 2" Von Mnolf - Foto scattata a Innsbruck, Austria (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia 
2. "Coomassie3" di Yikrazuul - Opera propria (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia