Differenza tra pagina SDS e pagina nativa

Differenza chiave - Pagina SDS vs Nativa Pagina
 

SDS e pagina nativa sono due tipi di tecniche di elettroforesi su gel di poliacrilamide utilizzate in Biologia Molecolare. Il differenza fondamentale tra la pagina SDS e la pagina nativa è il tipo di gel di poliacrilammide utilizzato. Nella pagina SDS viene quindi utilizzato un gel denaturato, le molecole vengono separate in base al loro peso molecolare. Al contrario, nella pagina nativa, vengono utilizzati gel non denaturanti. Pertanto, le molecole vengono separate in base alla loro dimensione, carica e forma.

L'elettroforesi su gel di poliacrilammide (pagina) utilizza un gel ottenuto mediante polimerizzazione di monomeri acrilammidici con metilen-bisacrilammide. Il poliacrilammide è più duro e più stabile al calore rispetto all'agarosio. I gel di poliacrilammide hanno una dimensione dei pori più piccola che consente l'efficiente separazione delle proteine. Esistono due tipi principali di impostazioni di pagina, ovvero Pagina SDS e Pagina nativa. Pagina SDS o Sodio-dodecil solfato Elettroforesi su gel di poliacrilammide separa le proteine ​​in base ai loro pesi molecolari. I gel denaturanti sono utilizzati nella pagina SDS. La pagina nativa usa gel non denaturanti e separa le proteine ​​in base alla loro dimensione, carica e forma (conformazione 3D).

CONTENUTO

1. Panoramica e differenza chiave
2. Cos'è la pagina SDS
3. Che cos'è la pagina nativa
4. Somiglianze tra pagina SDS e pagina nativa
5. Confronto affiancato: pagina SDS e pagina nativa in formato tabulare
6. Sommario

Cos'è la pagina SDS?

La pagina SDS è la tecnica elettroforetica più comune utilizzata per separare le proteine ​​in base al loro peso molecolare. Il gel viene prodotto aggiungendo SDS (sodio dodecil solfato), che è un detergente. SDS proteggi le proteine ​​in monomeri. SDS è un detergente anionico. Pertanto, aggiunge una carica negativa netta alle proteine ​​entro un ampio intervallo di pH. Quando la carica netta negativa viene trasmessa sulle molecole proteiche, a causa della variazione di carica, le strutture complesse vengono scomposte. A causa della carica negativa, le proteine ​​attraggono verso la fine positiva. Così le molecole a basso peso molecolare viaggiano più velocemente sulla matrice di gel e possono essere osservate vicino all'anodo, mentre le proteine ​​a più alto peso molecolare sono osservate più vicine ai pozzetti.

Figura 01: Pagina SDS

Il legame SDS alla catena polipeptidica è proporzionale alla sua massa molecolare relativa. Pertanto, la massa molecolare può anche essere determinata tramite la pagina SDS. La colorazione dei gel della pagina SDS è effettuata mediante colorazione con blu di bromofenolo. Le applicazioni della pagina SDS vanno in misura maggiore dove possono essere utilizzate per stimare la massa molecolare relativa e per determinare l'abbondanza relativa di proteine ​​in una miscela di proteine. La pagina SDS può anche essere utilizzata per determinare la distribuzione della proteina in una miscela di proteine. La pagina SDS viene anche applicata per purificare e valutare le proteine. Viene utilizzato come procedura preliminare per il western blotting e l'ibridazione, che a sua volta viene utilizzato per la mappatura e l'identificazione delle proteine.

Che cos'è la pagina nativa?

L'elettroforesi del gel di poliacrilamide nativo (pagina nativa) utilizza un gel non denaturante. Pertanto, la SDS o qualsiasi altro agente denaturante non viene aggiunto alla matrice gel. Nella pagina nativa, la separazione delle proteine ​​si basa sulla carica e sulla dimensione della proteina. Pertanto, la mobilità della proteina dipende dalla carica e dalle dimensioni della proteina.

La carica della proteina dipende dalle catene laterali degli aminoacidi. Se le catene laterali sono caricate negativamente, la proteina riceverà una carica negativa complessiva e viceversa. Le proteine ​​mantengono una conformazione 3D a causa del piegamento che avviene. Risultati di piegatura dai diversi tipi di legame in proteine ​​quali legami disolfuro, interazioni idrofobiche e legami idrogeno. Pertanto, se la pagina nativa viene trasportata a un pH neutro, le proteine ​​saranno separate in base alla forma molecolare della proteina. Pertanto, la pagina nativa può essere utilizzata come tecnica sensibile per rilevare il cambiamento nella carica o nella conformazione della proteina.

Il vantaggio principale della pagina nativa è che la proteina utilizzata per l'analisi della pagina può essere recuperata nel suo stato originale dopo l'analisi della pagina, poiché la proteina non viene disturbata durante il processo. La pagina nativa è una tecnica relativamente veloce e la stabilità della proteina aumenta.

Figura 02: pagina nativa

Al completamento della corsa del gel, il gel della pagina nativa può essere visualizzato colorando con blu di bromofenolo o con qualsiasi altro reagente di colorazione adatto. Le applicazioni della pagina nativa includono la separazione delle proteine ​​acide incluse le glicoproteine ​​come l'eritropoietina umana ricombinante o l'identificazione delle proteine ​​presenti nell'albumina sierica bovina (BSA).

Quali sono le somiglianze tra la pagina SDS e la pagina nativa?

• Sia il sistema SDS Page che Native Page usano il gel di poliacrilammide come matrice del gel.
• Entrambi sono usati per la separazione e l'identificazione delle proteine.
• Entrambi usano la mobilità elettroforetica per separare i composti.
• Entrambi possono essere eseguiti in modo verticale o orizzontale (principalmente come impostazioni di pagina verticale perché la lunghezza della corsa è maggiore).
• L'apparecchio di elettroforesi incluso il serbatoio di gel, i pettini, l'alimentazione elettrica è necessario per il funzionamento di entrambe le tecniche.
• La visualizzazione del gel può essere effettuata mediante metodi di colorazione in entrambe le tecniche.

Qual è la differenza tra pagina SDS e pagina nativa?

Pagina SDS rispetto alla pagina nativa
Pagina SDS o Sodio-dodecil solfato Pagina separa le proteine ​​in base al loro peso molecolare e utilizza un gel denaturato.	La pagina nativa usa gel non denaturanti e separa le proteine ​​in base alla loro dimensione, carica e forma (conformazione 3D).
Tipo di gel
Un gel denaturato viene utilizzato nella pagina SDS.	Un gel non denaturante è usato nella pagina nativa.
Presenza di SDS
La SDS è presente come detergente per conferire una carica negativa sul campione nella pagina SDS.	SDS non è presente nella pagina nativa.
Base di separazione
La separazione delle proteine ​​dipende dal peso molecolare della proteina nella pagina SDS.	La separazione dipende dalla dimensione e dalla forma della molecola proteica nella pagina nativa.
Stabilità della proteina
La stabilità della proteina è bassa nella pagina SDS.	La stabilità della proteina è elevata nella pagina nativa.
Recupero della proteina originale
Non è possibile in quanto è denaturato nella pagina SDS.	Possibile nella pagina nativa.

Sommario - Pagina SDS vs Nativo Pagina

Pagina SDS e pagina nativa sono due tipi di tecniche di elettroforesi su gel di poliacrilamide utilizzate per separare le proteine. La pagina SDS è trattata con un detergente chiamato SDS. La SDS impartisce una carica negativa complessiva alla proteina, che quindi determina la denaturazione della proteina. Pertanto, le proteine ​​sono separate in base al loro peso molecolare. Al contrario, la tecnica della pagina nativa non utilizza alcun agente denaturante. Così le proteine ​​sono separate o in base alla loro dimensione o alla forma. Questa è la differenza tra la pagina SDS e la pagina nativa.

Riferimento:

1. "Principio e metodo dell'elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS-PAGE)." Principio e metodo dell'elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Disponibile qui
2. "Gel nativi". Alliance Protein Laboratories | Servizi di caratterizzazione biofisica. Disponibile qui  

Cortesia dell'immagine:

1.'SDS-PAGE Elettroforesi'da Bensaccount su Wikipedia in inglese, (CC BY 3.0) attraverso Commons Wikimedia  
2. Caricare un campione in elettroforesi su gel di poliacrilamide con Blaz Nemec da Lubiana, Slovenia (CC BY-SA 2.0) via Commons Wikimedia